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技术资讯

微生物的检测方法之显微镜法

     来源:天诗蓝盾杀菌剂     发布时间:2021-09-17     电话:025-58393758
  如何测定微生物的数量对于微生物研究至关重要,目前最常用的方法包括显微镜法、平板计数法、分光光度法、流式细胞法等,各有优缺点,本文首先介绍显微镜法。
 
微生物的检测方法之显微镜法
 
  细胞数量可以通过简单的显微镜观察和计数进行测定。显微镜计数可以对玻片上干燥的样品或液体样品进行计数。干燥的样品可以染色,以增加细胞与其背景之间的对比。对于液体样品,计数室由刻蚀在载玻片表面的已知面积的正方形网格组成。在显微镜下,单位面积网格上的细胞数量可以数出来,每毫升悬浮液的细胞数就能简单计算出来。
 
  显微计数是一种快速简便的微生物细胞数量估算方法,但存在以下问题:如果没有特殊的染色技术,就无法区分死细胞和活细胞;实验的再现性一般;小小的细胞往往很难看的清楚,这可能导致计数不准;如果细胞悬浮液的密度低(少于106个细胞/毫升),视野中将几乎没有细胞;对于运动的细胞,观察前需要将其杀死(通常用甲醛)或固定;样品中的杂质会产生误导。
 
  对细胞进行染色是常见的研究手段。例如,DAPI(4,6-联脒-2-苯基吲哚)能够染色所有细胞,因为它能够穿透细胞膜与细胞核中的双链DNA发生反应产生比自身强20多倍的荧光,DAPI染剂利用紫外光激发,与DNA结合时最大吸收波长为358 nm,最大发射波长461 nm;荧光染料PI(碘化丙啶)是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂,但染料不能透过细胞膜,常用于死细胞的检测。因此,DAPI/PI染色经常组合使用,用于检测细胞的生存状态。通过将荧光染料附着在特定的核酸探针上,可以制备出对某些生物(群)具有高度特异性的荧光染色剂,这方面用的很多的是荧光原位杂交(FISH)。基于催化特定代谢过程的功能基因的荧光探针也已开发出来,如果细胞被这些探针染色,就可以推断它们具有行使该代谢的能力,对研究微生物生态很有帮助。

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